Mecanismos de resistencia en micobacterias de crecimiento rápido / Resistance mechanisms of rapid growing mycobacteria

Las Micobacterias de crecimiento rápido (MCR) son patógenos oportunistas capaces de ocasionar infecciones en piel, pulmonares y diseminadas. En Venezuela existe un incremento de estas infecciones derivadas de procedimientos invasivos, entre ellas cirugías estéticas. El tratamiento de esas infecciones requiere la administración de al menos dos antibióticos por varios meses. En la presente revisión se describe los mecanismos de resistencia a los antibióticos que se han reportado en las MCR, principalmente las tres especies que frecuentemente se han asociado a infecciones en piel: M. abscessus, M. chelonae y M. fortuitum. Los factores más importantes relacionados a la resistencia en los esquemas de tratamiento son: cambios relacionados en la permeabilidad de la membrana al antibiótico, la inactivación enzimática y modificaciones del sitio blanco. En MCR se han evidenciado la presencia de betalactamasas con actividad penicilinasas y cefalosporinasas y de acetil-transferasas que pueden modificar los aminoglicósidos. Las modificaciones de las regiones ARNr 23S y ARNr 16S han permitido explicar, en parte, la resistencia a macrólidos y aminoglicósidos. La metilación de los sitios blanco de acción de los macrólidos es otro factor importante, sobre todo en especies como M. abscessus. Éste último mecanismo explica la falla terapéutica que se ha reportado en pacientes tanto en infecciones pulmonares como en infecciones en piel. Es necesario ampliar el estudio sobre los mecanismos de resistencia en estas especies, tomando en consideración las complicaciones que llevan estas infecciones y los tiempos prolongados de tratamientos pudiendo generar efectos secundarios en los pacientes y la frustración cuando ocurre la falla terapéutica.

The rapid growing mycobacteria (RGM) are opportunist pathogens able to cause skin, pulmonary and disseminated infections. In Venezuela there is an increase in the prevalence of these infections especially following esthetic surgery. The treatment of such infections is cumbersome requiring the administration of at least two antibiotics for several months. In the present review we describe the principal antibiotic resistance mechanisms reported for RGM, particular for the species most frequently associated with skin and soft tissue infection: M. abscessus, M. chelonae and M. fortuitum. The most important factors associated with resistance to antibiotics are impermeability of the cell membrane, enzymatic inactivation and changes in the target site. In RGM the presence of the beta-lactamases with penicillinases and cephalosporinase activity has been demonstrated and the presence of acetyl-transferases which can modify aminoglycosides. Changes in the 23S rRNA and 16S rRNA regions has allowed to explain, partly macrolide and aminoglycoside resistance. Mutation in the macrolide target site is another important resistance mechanism, particularly for the species group M. abscessus. This last mechanism can explain treatment failure reported in the patients with pulmonary or skin infection. We conclude that there is a need for more extensive studies about the mechanisms of antibiotic resistance of RGM; taking into account the complications of these infections, the prolonged treatment long time, producing secondary effects and the frustrations of patient and physician caused by therapeutic failures.

Diseño del kit de tinción Ziehl Neelsen del Instituto nacional de Higiene "Rafael Rangel" / Design Kit Ziehl Neelsen the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"

La tinción de Ziehl Neelsen (ZN), es una técnica de coloración de microorganismos para la identificación de patógenos, como Mycobacterium tuberculosis causante de la tuberculosis, que requiere de tres (03) soluciones: Carbol Fucsina Fenicada (Fucsina Básica), Azul de Metileno al 1% y Solución Decolorante, que se elaboran en la Sección de Reactivos y Colorantes del Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" y se emplean en el diagnóstico de tuberculosis. Esta investigación surgió con el propósito de comprobar el tiempo de caducidad y condiciones de almacenamiento de dichos productos y presentarlos en un estuche tipo kit para su distribución, en apoyo a la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pública y comercialización con otros entes. Se realizó el ensayo de tres (3) lotes del kit de Ziehl Neelsen; con su respectiva contramuestra que fue evaluada en el análisis final. Se registraron los parámetros físicos de temperatura y humedad relativa bajo condiciones normales de almacenamiento en el laboratorio, con las muestras protegidas de la luz. Se evaluó la funcionalidad por medio de la tinción ZN observada bajo microscopio, de tres (03) muestras con ATCC 700686: M. peregrinum y ATCC 29213: S. aureus por lote; tomando en cuenta el exceso de colorante, y la definición de las coloraciones. Estas evaluaciones se realizaron durante dos (02) años encontrándose como resultado que física y funcionalmente los productos contentivos en el kit se mantenían estables, fijándose un tiempo de caducidad de dos (02) años.

Ziehl Neelsen (ZN) is a staining technique of microorganisms for the identification of pathogens as Mycobacterium tuberculosis, causative of tuberculosis, which requires three (03) solutions: Carbol Fuchsin combined with Phenol (Basic Fuchsin), Methylene Blue 1% and Bleaching solution, which are prepared in Section of Reagents and Coloring of the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel" and are used in the diagnosis of tuberculosis. This investigation was made with the purpose of checking the shelf life and storage conditions of these products and present them in a kit type container for distribution in support of the National Network of Public Health Laboratories and marketing with other entities. The analysis was performed in three (3) batches of the Ziehl Neelsen kit; with their respective counter sample that was evaluated in the final analysis. The physical parameters of temperature and relative humidity were recorded in the laboratory under normal storage conditions with samples protected from light. The functionality was evaluated through ZN staining being observed under a microscope three (03) samples with ATCC 700686: M. peregrinum and ATCC 29213: S. aureus by Batch; taking into consideration the excess dye, and the definition of the colors. These evaluations were conducted for two (02) years found as main result that physically and functionally the products in the kit were stable, and can set an expiration time of two years.

Serotipos invasivos de Streptococcus pneumoniae en niños menores de 5 anos en Venezuela: 1999-2007 / Serotype distribution of invasive isolates of Streptococcus pneumoniae from Venezuelan children under 5 years of age between: 1999-2007

Introduccion: La enfermedad neumococica es una de las principales causas de mortalidad infantil en el mundo. Ob je - tivo: Determinar los serotipos de Streptococcus pneumoniae que producen enfermedad invasiva en ninos menores de 5 anos en Venezuela. Materiales y Metodos: Se establecieron 7 hospitales centinelas. El estudio incluyo variables demograficas y epidemiologicas. El Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel realizo la confirmacion y serotipificacion de las cepas. Resultados: Entre 1999-2007 fueron se - ro tipificadas 493 cepas de S. pneumoniae. Los serotipos mas frecuentes fueron el 14 (34,9%), 6B (13,8%), 5 (9,1%), 1 (6,1%) y 19A (6,1%), que correspondieron al 70% de las cepas. La cobertura global de la vacuna polisacarida conjugada heptavalente seria de 66,9% en bacteriemias, 56,6% en neumonias y 64,6% en meningitis. La va cuna decavalente tendria una cobertura teorica global de 76,9%, con valores similares en las tres entidades clinicas y la trecevalente tendria una cobertura potencial teorica de 90%. Conclu sio - nes: Esta investigacion reporta la distribucion de los serotipos invasivos de S. pneumoniae en Venezuela y permiten in ferir que la introduccion de vacunas neumococicas conjugadas en nuestra poblacion pediatrica ten drian un impacto positivo en la prevencion de la enfermedad.

Background: Pneumococcal disease is the principal cause of morbidity and mortality in children. Objective: To determi - ne the serotype distribution of invasive S. pneumoniae strains isolated from children under 5 years in Venezuela. Ma terials and Methods: 7 hospitals settled down sentries. The study included demographic variables and epidemiologists. The National Institute of Higiene gRafael Rangelh rea li - sed the confirmation and serotyping of the strains. Results: Bet ween 1999-2007 493 strains of S. pneumoniae were se - ro typing. The most frequent serotypes, with 70% of all the strains belonging to these 5 serotypes were: 14 (34,9%), 6B (13,8%), 5 (9,1%), 1 (6,1%) and 19A (6,1%). The potential co verage of the 7-valent conjugate vaccine is 66,9% for bacteriemia, 56,6% for pneumonias and 64,6% for meningitis respectively. The potential coverage of the 10-valent conjugate vaccine is (76,9%) with similar values for the three clini cal manifestations and the 13-valent has a potential coverage of 90%. Conclusions: This investigation reports the distribution of invasive S. pneumoniae serotypes in Venezuela and allow to infer that the conjugated vaccines introduction in our pediatric population could have a positive impact on the prevention of pneumococcal disease.

Colera y Vibrio cholerae / Cholera and Vibrio cholerae

El Colera es una diarrea infecciosa aguda producida por Vibrio cholerae. La transmision se produce predominantemente a traves de agua o alimentos contaminados. La administracion de antibioticos puede disminuir la severidad de los sintomas. A partir de 1977, se han caracterizado cepas de V.cholerae O1 con resistencia multiple a los antibioticos. Los determinantes de resistencia han sido reportados principalmente asociados a plasmidos e integrones. Historicamente, solo las cepas del serogrupo O1 habian sido asociadas con epidemias de Colera. En 1992, un nuevo serogrupo, O139, emergio como la cepa causante de un gran brote de Colera. La diarrea masiva es causada por la toxina colerica (CT). El operon que codifica CT forma parte del genoma de un bacteriofago lisogenizado en la bacteria el cual permite interconversion de cepas. Se ha demostrado que el "quorum-sensing" regula negativamente la expresion de los genes de viru len cia en V. cholerae. El genoma de V. cholerae El Tor consiste en dos cromosomas circulares y con una pronunciada asimetria en la distribucion de los genes, en el cual se han detectado varias islas patogenicas (PAIs). Se ha reportado la existencia de V.cholerae "viable no cultivable" en ambientes acuaticos. Este fenomeno representa una nueva perspectiva en la vision de la "sobrevivencia" de V.cholerae en el ambiente e incorpora nuevas implicaciones epidemiologicas. El Colera ha sido catalogado como una "enfermedad emergente y reemergente", que amenaza a los paises en desarrollo. Los resultados de distintos grupos de investigadores han establecido que la transferencia horizontal de genes tiene influencia en la patogenicidad y ha sido importante en la evolucion de V. cholerae. Todavia permanecen sin descifrar algunos misterios en el origen de las cepas patogenas, pero, con las nuevas tecnologias seguro se develaran datos significativos que puedan dar luces sobre el origen de la patogenicidad de este organismo, que fue en ...

The Cholera is an acute infectious diarrhea produced by Vibrio cholerae. Mainly the transmission takes place through contaminated water or foods. Antibiotic administration during the acute phase of the disease can reduce the severity of the symptoms. Since 1977, strains of V. cho lerae O1 with multiple antibiotic resistances have been characterized. The resistance determinants have been reported mainly associated to plasmids and integrones. Historically, the serogrupo O1 had been associated with epidemics of Cholera. In 1992, a new serogrupo, designated O139, emerged as the strain of cause from a big Cholera outbreak. The massive diarrhea is caused by the choleric toxin (CT). Operon ctxAB, that codifies the CT, is carried in lisogenic filamentous bacteriophage in the bacterium. "Quorum-sensing" negatively regulates the expression of the virulence genes in V.cholerae. The genome of V.cholerae El Tor consists of two circular chromosomes with a pronounced asymmetry in the distribution of the genes. Several patogenics islands (PAIs) have been detected in the genome of V.cholerae. In aquatic environments the existence of "viable but non cultivable" V.cholerae, has been reported. This phenomenon represents a new perspective in the role in survival in the natural environment with new epidemiological implications. The Cho lera has been catalogued as an "emergent, re-emergent disease" that threatens developing countries. The results of different investigators groups have established that horizontal transference of genes had influence in the pathogenicity and has been important in the evolution of V.cholerae. Several mysteries in the origin of the pathogenics clones still remain, but, the new technologies will reveal significant data about the origin of this pathogen, former an estuary innocuous bacterium.

Programa de control de calidad de Discos antibióticos / Quality of control program of antibiotics disks

La prueba de Antibiograma se usa rutinariamente para medir la susceptibilidad a los antibióticos de las bacterias aisladas en muestras clínicas. Asegurar la calidad de los discos de antibióticos es indispensable para que se produzcan resultados confiables y oportunos en el Antibiograma. Para ello se estableció un programa de control de calidad de los discos antibióticos. Se realizaron 336 mediciones durante 6 meses, con sólo 5(1,2 por ciento) resultados fuera del rango establecido y 27(8,0 por ciento) resultados en los límites. De los 5 resultados obtenidos fuera de los rangos, 4 de ellos fueron valores por debajo del límite inferior, todos ocurrieron el mismo día, lo que sugiere algún error en la técnica. De los 14 antibióticos probados, 9 de ellos tuvieron tendencia a la baja y 5 con tendencia a la alta. Debido a resultados en los límites inferiores o por debajo se descartaron 6 viales. El programa de Control de Calidad de los discos de Antibióticos ha sido un éxito, todo el personal ha tomado conciencia de que el control de calidad en un laboratorio es una obligación en beneficio del paciente